細(xì)菌蛋白提取試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

Bacterial Protein Extraction Kit 
包裝規(guī)格：10 Assays /50 Assays 
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
細(xì)菌蛋白提取試劑盒能夠從細(xì)菌細(xì)胞中提取生物活性可溶性蛋白質(zhì)和高純度包涵體。能夠與FLAG，poly-His和GST融合
蛋白親和層析純化系統(tǒng)兼容，還能與許多酶，蛋白質(zhì)和蛋白酶抑制劑混合物兼容。該試劑盒能夠滿足1升細(xì)胞培養(yǎng)物（OD 600 
= 1）或10X 100~200 mg濕重的大腸桿菌的提取實(shí)驗(yàn)。
組成：
組成 600596 600596 
10X Cell lysis buffer 5 ml 25 ml 
DNase/RNase 200 μl 1 ml 
Lysozyme 1 ml 5 ml 
PMSF 500 μl 2500 μl 
2X SDS gel-loading buffer 0.2 ml 1 ml 
保存條件：
常溫運(yùn)輸，DNase/ RNAse，Lysozyme，2X SDS gel-loading buffer 和 PMSF 在-20°C 保存，其他產(chǎn)品在室溫下保存，保質(zhì)
期 24 個(gè)月。
提取步驟：
1. 5000 xg離心10 min來收集表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞。棄掉上清并用PBS沖洗沉淀。將細(xì)胞沉淀每100 ml細(xì)胞培養(yǎng)物（OD600 
= 1時(shí)）重懸于4 ml的1X細(xì)胞裂解緩沖液中。
2. 加入40 μl PMSF和80 μl溶菌酶，37℃孵育細(xì)胞懸浮液30 min。
3. 將混合物放在搖床上孵育10 min。
4. 加入20 ul DNaseI / RNase，37°C下繼續(xù)在搖床上孵育10 min。
5. 4°C下3,000 g離心30 min，去除不溶物。將細(xì)胞裂解液收集到干凈的試管中。
6. 通過10%SDS-PAGE電泳實(shí)驗(yàn)，上樣量20 μl來分析提取物。將含有目的蛋白的組分保存在-70°C或直接通過純化柱純化。

細(xì)菌蛋白提取試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

Notes 
1. 可以加入蛋白酶抑制劑，但使用Ni2+親和柱純化時(shí)不能添加EDTA或其他螯合劑，因?yàn)轵蟿?huì)破壞Ni柱與組氨酸標(biāo)簽
的結(jié)合。
2. 上清液可能需要通過0.45 μm的過濾器，以防止后續(xù)純化過程中樹脂堵塞。
3. 細(xì)菌細(xì)胞也可以通過超聲處理（3×10秒）來溶解某些蛋白質(zhì)，但是在超聲處理過程中需要保持低溫。
4. 在進(jìn)行蛋白提取后盡快使用提取的蛋白質(zhì)。
5. 溶于異丙醇的PMSF應(yīng)保存在-20°C。

細(xì)菌蛋白提取試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)