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谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)活性檢測(cè)意義!
檢測(cè)意義:
GOT( 2.6.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化可逆轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),是氨基酸代謝的重要酶。此外,GOT在心肌細(xì)胞中含量高,一般常作為心肌梗塞和心肌炎的輔助檢查。肝臟損害時(shí)其血清濃度也可升高。
GOT催化 α-同戊二酸和天門(mén)冬氨酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應(yīng),生成谷氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸進(jìn)一步自行脫羧生成丙酮酸;丙酮酸可與2,4-二硝基苯肼反應(yīng)生成2,4-二硝基苯腙,在堿性條件下顯棕紅色;測(cè)定505nm吸光度的變化,即可計(jì)算GOT酶活力。
樣品測(cè)定準(zhǔn)備 :
1、 細(xì)胞或微生物樣品的制備 :
先收集細(xì)胞或微生物樣品到離心管內(nèi),棄上清,按照每250萬(wàn)細(xì)胞或微生物加入0.25mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。3500g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織:
稱取約0.05g組織,加入0.5mL提取液進(jìn)冰浴行勻漿。3500g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
生物試劑的使用常識(shí):
(1)試劑切忌與手接觸(有些試劑有強(qiáng)腐蝕性、等特性)。
(2)要用潔凈的藥勺,量筒或滴管取用試劑,絕對(duì)不允許用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種試劑。取完一種試劑后,應(yīng)將工具洗凈(藥勺要擦干)后,才可取用另一種試劑。
(3)試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊,不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管,絕不允許張冠李戴,用完后請(qǐng)及時(shí)將瓶放回原處,以免遺忘,帶來(lái)不便。
(4)已取出的試劑不能再放回原試劑瓶?jī)?nèi)(怕產(chǎn)生原試劑的再次污染)。