甘油含量檢測試劑盒-甘油濃度測定

甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標，但檢測更方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法和經(jīng)典GPO-Trinder酶學反應相結合的方法，通過比色法測定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過優(yōu)化后，操作步驟更加簡單，檢測線性范圍在10-1200µmol/L，可靠性和重復性俱佳，適合生物醫(yī)學、食品實驗室檢測。

甘油濃度測定：

參見下表進行加樣。為使反應時間盡量一致，減小實驗誤差，可先加入標準品、待測樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當甘油濃度較低時，可將待測樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合，然后再進行測定，但是如果樣品體積超過100µl時將會稀釋工作液中酶的濃度，使反應靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性范圍，可進行適當稀釋，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計算樣品中甘油濃度。）

37oC或25oC反應 10分鐘。反應平衡后顏色在60分鐘內穩(wěn)定。

先用蒸餾水+工作液的空白管調零，然后測定各管OD值。

繪制標準曲線并計算甘油濃度。

附Excel作圖步驟：各標準管OD值為y軸，標準品濃度為x軸。(1)鼠標左鍵圈住數(shù)據(jù)，點擊做圖向導，選擇-散點圖-，點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上的某一點，點擊-添加趨勢線-，點擊-選項-，點擊-顯示公式-和-R2值-。

說明：

1、維sheng素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。

2、正常血清甘油濃度為20-130µmol/L，細胞培養(yǎng)時須用不含酚紅的無色無血清培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基中含有酚紅，可以選擇含有酚紅的無細胞培養(yǎng)基作為對照進行測定

強堿條件下甘油和二價銅的絡合物顯絳藍色，所以利用甘油的這個特性就可以輕松搞定。主要試劑是AR級的甘油、氫氧化鈉、硫酸銅。向氫氧化鈉堿化的甘油溶液里加硫酸銅，一定要保證甘油被*絡合，并且保證多余的二價銅都以氫氧化銅沉淀形式存在，但是氫氧化鈉也不要加太多。甘油銅可見區(qū)大吸收波長是在630nm。先作個標準系列，繪出吸光度-濃度曲線，然后把待測試樣吸光度測出來在標準曲線上一算，濃度就得到了。