堿性磷酸酶顯色試劑盒BCIP/NBT

產(chǎn)品描述：

本試劑盒應(yīng)用于胚胎干細(xì)胞（ES）和誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞（iPS）的鑒定，以及免疫組化、免疫印跡等實(shí)驗(yàn)中的堿性磷酸酶顯色。試劑盒內(nèi)的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽（BCIP）/硝基四氮唑藍(lán)（NBT）是堿性磷酸酶（AP）的常用底物之一，BCIP在AP的催化下會(huì)被水解生成強(qiáng)反應(yīng)性產(chǎn)物，后者與硝基四氮唑藍(lán)（NBT）反應(yīng)生成不溶性產(chǎn)物，使之呈現(xiàn)深藍(lán)色至藍(lán)紫色。

操作指南:

1. AP顯色工作液的配制：

取20μl 150×NBT溶液加入到3ml堿性磷酸酶顯色反應(yīng)緩沖液，充分混合均勻，再加入30μl 100×BCIP溶液，配置成工作液，如需改變工作液體積，可按相同比例適量配制。1h內(nèi)使用。

2.  顯色步驟:

a)  檢測(cè)細(xì)胞的內(nèi)源性堿性磷酸酶：吸出培養(yǎng)基，PBS潤(rùn)洗3次，加入4％多聚甲醛固定1-2min。吸出固定液，使用TBST清洗三次，加入顯色工作液，室溫避光孵育5-30分鐘，顯色至預(yù)期深淺后，用PBS潤(rùn)洗1次，然后保存于PBS溶液中，顯微鏡下觀察結(jié)果。

b)  檢測(cè)組織切片或膜上結(jié)合的堿性磷酸酶抗體：使用洗滌液洗滌完后，加入適量工作液，保證*覆蓋樣品表面，室溫避光孵育5-30分鐘，顯色至預(yù)期深淺后，去除工作液，用蒸餾水清洗1-2次終止顯色反應(yīng)。

注意事項(xiàng):

1. BCIP和NBT對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

保存條件：

2-8℃保存，100×BCIP溶液和150×NBT溶液需避光保存，一年有效。