谷氨酸(Glu)檢測(cè)試劑盒（比色法）檢測(cè)原理！

產(chǎn)品說(shuō)明：
Glu 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的 20 種氨基酸之一，而
且通過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來(lái)源之一。此外，Glu 還是味精的主
要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生物試劑。
 

谷氨酸脫氫酶（GDH）催化谷氨酸和 NAD 生成α-酮戊二酸、NADH 和 NH4+，引起 340nm 處吸
光度的上升，通過(guò)測(cè)定 340nm 吸光度的變化，計(jì)算谷氨酸含量。

需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
 

操作步驟：
一、谷氨酸提取
細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品：收集細(xì)胞或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)
胞加入 1mL 試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），10000rpm，常溫離心 10min，取上清待測(cè)。稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，10000 rpm，常溫離心 10min，取上清待測(cè)。

谷氨酸含量計(jì)算

1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以谷氨酸含量（µmol/mL）為 x 軸，標(biāo)準(zhǔn)管?A 為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=kx+b。將測(cè)定管?A 帶
入方程得到 x 值。
2、氨基酸含量計(jì)算：
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
谷氨酸含量（µmol/mg prot）=x×V 樣本÷（Cpr×V 樣本）=x÷Cpr。
（2）按照樣本鮮重計(jì)算
谷氨酸含量（µmol/g 鮮重）=x×V 樣本÷（W÷V 樣總×V 樣本）=x÷W。
（3）按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
谷氨酸含量（μmol/10
4 cell）＝x×V 樣本÷（500÷V 樣總×V 樣本）=0.002x。
V 樣總：加入提取液體積，1mL；V 樣本：加入的樣本體積，0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；
W：樣本鮮重，g；1000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，1000 萬(wàn)。
 

注意事項(xiàng)：
為提高檢測(cè)靈敏度，測(cè)定管的吸光值應(yīng)小于 1 且?A 小于 0.4，若大于此值則需要將上清液用試
劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定。

谷氨酸(Glu)檢測(cè)試劑盒（比色法）檢測(cè)原理！